Questão 87242

Um único promotor que é ativado pelo Indutor A e reprimido pelo Indutor B controla a expressão da GFP.

O gene da GFP é colocado sob o controle de um promotor que requer dois fatores de transcrição distintos para sua ativação. O gene do primeiro fator de transcrição é controlado por um promotor induzível pelo Indutor A, e o gene do segundo fator de transcrição é controlado por um promotor induzível pelo Indutor B.

O Indutor A ativa a expressão de um repressor que se liga ao promotor da GFP, enquanto o Indutor B ativa a expressão de um ativador que se liga ao mesmo promotor.

A expressão da GFP é controlada por um único promotor forte e constitutivo, mas a estabilidade da proteína GFP é dependente da presença simultânea dos Indutores A e B, que se ligam a domínios de degradação específicos na proteína.

Dois genes repórteres diferentes são utilizados: a GFP, cuja expressão é ativada pelo Indutor A, e a RFP (Proteína Vermelha Fluorescente), cuja expressão é ativada pelo Indutor B. A detecção da lógica 'AND' é feita por citometria de fluxo, selecionando células que são simultaneamente verdes e vermelhas.