Questão 87235

A aminopterina bloqueia a via 'de novo' de síntese de nucleotídeos. As células de mieloma utilizadas são deficientes na enzima timidina quinase (TK), da via de recuperação ('salvage'), e, portanto, morrem. Os linfócitos B não fusionados morrem por senescência natural. Apenas os hibridomas sobrevivem, pois herdam a imortalidade do mieloma e a via de recuperação funcional do linfócito B.

A aminopterina é um agente quimioterápico que induz apoptose seletivamente em células de mieloma não fusionadas. Os linfócitos B morrem naturalmente, e os hibridomas são resistentes à aminopterina devido a uma mutação herdada do linfócito B.

O meio HAT seleciona positivamente o crescimento de hibridomas, pois a hipoxantina e a timidina são fatores de crescimento essenciais apenas para as células fusionadas, enquanto as células parentais não conseguem metabolizá-los.

A aminopterina bloqueia a via 'de novo' de síntese de nucleotídeos. As células de mieloma utilizadas são deficientes na enzima hipoxantina-guanina fosforribosiltransferase (HGPRT), da via de recuperação. Os linfócitos B não fusionados morrem por terem vida útil limitada. Os hibridomas sobrevivem porque herdam a imortalidade da célula de mieloma e a enzima HGPRT funcional do linfócito B, utilizando a hipoxantina e a timidina do meio pela via de recuperação.

As células de mieloma e os linfócitos B não fusionados são eliminados porque o meio HAT possui uma alta concentração de antibióticos para os quais apenas os hibridomas possuem genes de resistência, inseridos previamente no linfócito B.