Questão 87206

A técnica de Reação em Cadeia da Polimerase em tempo real, ou qPCR (Quantitative Polymerase Chain Reaction), permite a quantificação precisa de ácidos nucleicos em uma amostra. Diferente da PCR convencional, a qPCR monitora a amplificação do DNA em cada ciclo através da detecção de um sinal de fluorescência. Uma das abordagens mais comuns utiliza sondas de hidrólise, como as sondas TaqMan®, que são oligonucleotídeos com um fluoróforo (reporter) em uma extremidade e uma molécula supressora (quencher) na outra. Quando a sonda está intacta, a proximidade do quencher impede a emissão de fluorescência do reporter. Durante a fase de extensão da PCR, a atividade exonuclease 5'→3' da polimerase Taq cliva a sonda hibridizada ao molde, liberando o reporter do quencher e gerando um sinal fluorescente proporcional à quantidade de produto amplificado. O ciclo em que a fluorescência cruza um limiar pré-definido é chamado de 'Cycle Threshold' (Ct). Sobre a interpretação dos dados de qPCR, assinale a alternativa incorreta.