Questão 87187

A tecnologia de edição genética CRISPR-Cas9, derivada de um sistema de defesa imune bacteriano, revolucionou a biologia molecular. Seu mecanismo central envolve a nuclease Cas9, guiada por uma molécula de RNA (gRNA) a uma sequência específica do DNA alvo, onde realiza um corte de fita dupla (DSB). A célula, ao reparar esse DSB, pode fazê-lo por duas vias principais: a de união de extremidades não homólogas (NHEJ), propensa a erros e que frequentemente resulta em indels (inserções/deleções), ou a via de reparo direcionado por homologia (HDR), que utiliza um molde de DNA exógeno para inserir sequências específicas com alta precisão. Considerando a complexidade da regulação do reparo de DNA e as implicações para a terapia gênica, analise as afirmativas abaixo:

I. A eficiência da via HDR é significativamente maior em células que se encontram na fase S e G2 do ciclo celular, pois a maquinaria de reparo por homologia está otimizada nesse período para corrigir erros de replicação, tornando-a o alvo preferencial para terapias que exigem inserção precisa de genes.

II. Para silenciar um gene específico de forma permanente em uma linhagem celular, a estratégia mais eficaz utilizando CRISPR-Cas9 seria a de promover a via NHEJ, pois as indels resultantes provavelmente causarão uma mudança no quadro de leitura (frameshift), levando à produção de uma proteína truncada e não funcional.

III. Uma limitação crítica da tecnologia é o efeito 'off-target', onde o complexo gRNA-Cas9 cliva sequências de DNA que possuem alta homologia com o alvo, mas não são idênticas. Esse fenômeno é primariamente dependente da sequência 'protospacer adjacent motif' (PAM), que deve estar presente tanto no alvo 'on-target' quanto nos potenciais sítios 'off-target'.

Assinale a alternativa correta: