Questão 87013

Um pesquisador deseja clonar um gene que codifica uma proteína tóxica para E. coli. A simples tentativa de clonagem em um vetor padrão de alto número de cópias resulta na morte das células transformadas, mesmo na ausência de um indutor de expressão. Esse fenômeno é conhecido como 'leaky expression' ou expressão basal. Analise as estratégias abaixo para contornar esse problema:

I. Utilizar um vetor com um promotor rigorosamente controlado, como o promotor araBAD, que é reprimido na ausência de arabinose e ativado na sua presença.

II. Empregar uma cepa de E. coli que superexpressa o repressor do promotor utilizado no vetor (ex: cepas BL21(DE3)pLysS que expressam a lisozima T7 para inibir a T7 RNA polimerase basal).

III. Clonar o gene em um vetor de baixo número de cópias para reduzir a dose gênica e, consequentemente, a quantidade de proteína tóxica produzida a partir da expressão basal.

Quais estratégias são consideradas viáveis e eficazes para clonar um gene que codifica um produto tóxico?