Questão 86930

O uso de diferentes enzimas de restrição nos vetores de entrada e destino que geram extremidades incompatíveis.

A metilação diferencial dos sítios de recombinação, que os protege seletivamente da ação das recombinases.

A utilização de sequências de recombinação distintas e não compatíveis entre si (attL/attR e attB/attP), que são reconhecidas por diferentes complexos enzimáticos (LR e BP Clonase), garantindo a direcionalidade da reação.

A presença de um gene suicida no vetor de destino que é inativado pela recombinação, permitindo apenas a sobrevivência de clones com o inserto.

A dependência da reação de recombinação da temperatura, onde temperaturas diferentes favorecem a reação direta (BP) ou reversa (LR).