Questão 86925

Um pesquisador está desenvolvendo um projeto para expressar uma proteína quinase humana, conhecida por sofrer extensa fosforilação para sua ativação, em um sistema bacteriano (E. coli). Após a clonagem bem-sucedida do cDNA da quinase em um vetor de expressão pET, a indução da expressão com IPTG resultou em altos níveis de uma proteína com o peso molecular esperado, mas que se mostrou completamente inativa em ensaios enzimáticos. A análise por espectrometria de massa confirmou a sequência de aminoácidos correta, mas a ausência de modificações pós-traducionais. Diante deste cenário, analise as afirmativas a seguir:

I. A ausência de atividade da proteína é primariamente devida à incapacidade do sistema de E. coli de realizar as modificações pós-traducionais, como a fosforilação, que são essenciais para a função da quinase eucariótica.

II. A utilização de um vetor de expressão do tipo 'shuttle', que pode se replicar tanto em E. coli quanto em leveduras, resolveria o problema ao permitir que a proteína seja expressa e corretamente modificada no hospedeiro eucariótico.

III. O problema poderia ser contornado pela coexpressão da quinase humana com uma fosfatase específica em E. coli, para garantir o estado de fosforilação correto.

Está correto o que se afirma em: