Questão 179305

A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) revolucionou o diagnóstico molecular ao permitir a amplificação exponencial de sequências específicas de DNA. O sucesso da técnica depende da precisão dos ciclos térmicos e da fidelidade da enzima polimerase. No entanto, a presença de inibidores na amostra biológica pode comprometer a eficiência da reação, levando a resultados falso-negativos. Sobre os componentes e etapas da PCR convencional, analise os itens abaixo:

I. A etapa de desnaturação ocorre geralmente entre 94 e 96 graus Celsius, rompendo as pontes de hidrogênio entre as bases nitrogenadas.

II. O anelamento dos primers é a etapa mais crítica em termos de especificidade, sendo influenciado diretamente pela temperatura de fusão (Tm) dos iniciadores.

III. A DNA polimerase Taq, extraída de Thermus aquaticus, não possui atividade de revisão (proofreading) 3'-para-5' exonuclease, garantindo altíssima fidelidade na cópia.

IV. Os íons magnésio (Mg2+) atuam como cofatores essenciais para a atividade da polimerase, estabilizando a ligação entre os dNTPs e o molde.