Questão 1378396

a técnica de biologia molecular por PCR (Reação da Cadeia da Polimerase) promove, in vitro, por meio de artifícios de variação de temperatura, o que o organismo realiza naturalmente, em condições fisiológicas – a duplicação de cadeias de DNA, envolvendo nucleotídeos, sequências iniciadoras (primers) e enzima polimerases. Assim, é possível a obtenção de muitas cópias de uma sequência específica de ácido nucleico, a partir de uma fita molde.

durante o PCR, elevadas temperaturas separam as moléculas de DNA em duas cadeias simples, permitindo então a ligação de oligonucleotídios iniciadores (primers), os quais estão também em cadeias simples e geralmente constituídos por 50 a 100 nucleotídeos.

os iniciadores (primers) são responsáveis pela iniciação da reação, sua constituição define a sequência do DNA a ser replicada e o resultado obtido é a amplificação da mesma. Os primers são amplificados juntamente com a sequência alvo, podendo configurar uma reação positiva.

para a realização deste procedimento, o primeiro passo é extrair o material genético da célula ou do local a ser estudado com cuidado para que o mesmo não seja danificado e nem sofra contaminação. O material coletado é o DNA; todavia, pode-se utilizar o RNA, pois as técnicas são as mesmas para ambas as moléculas.

o princípio da PCR envolve três etapas básicas por ciclo, estimuladas pelo calor, que são repetidas por várias vezes, em ciclos: Abertura da fita de DNA que servirá de molde, por desnaturação térmica (etapa com duração entre 30s e 1min a temperatura de 52-56ºC); Pareamento de oligonucleotídeos sintéticos, que funcionam como os iniciadores da reação de polimerização, a cada uma das fitas do DNA molde, à região complementar da fita que sofrerá a duplicação (duração de 30s a 1min a temperatura entre 90 e 95ºC); Polimerização, através de uma enzima polimerase, das novas fitas de DNA a partir de cada um dos iniciadores, utilizando cada um dos quatro dNTP como substrato da reação de polimerização (duração entre 45s e 1min, a 92ºc).